La diseminación de patógenos cuarentenarios plantea un riesgo significativo para la producción agrícola mundial, amenazando la salud de los cultivos y alterando los agroecosistemas. La detección oportuna y precisa en el sitio-es crucial para prevenir brotes. La amplificación de la recombinasa polimerasa (RPA) y la ADNzima multicomponente (MNAzima) son tecnologías de detección isotérmica prometedoras; sin embargo, su integración se ha visto obstaculizada por el requisito de ADN monocatenario (ADNss) para la activación de la MNAzima, ya que RPA genera ADN bicatenario (ADNds). Para abordar esto, desarrollamos el biosensor OAR-MNA, una innovadora plataforma única-que acopla RPA asimétrica (aRPA) con reciclaje objetivo asistido por MNAzyme-. El biosensor se aplicó para detectar Acidovorax citrulli, el agente causante de la mancha bacteriana del fruto (BFB) en las cucurbitáceas. Al ajustar las concentraciones de los cebadores de RPA, aRPA genera abundante ADNss, lo que permite la detección visual de A. citrulli con un límite de detección de 20 copias/μL y una especificidad perfecta, superando el rendimiento de la RPA fluorescente. El biosensor demostró una concordancia del 100 % con qPCR en muestras de semillas y mantuvo un rendimiento sólido en homogeneizado de melón enriquecido. Nuestro análisis comparativo reveló ventajas del sistema OAR-MNA, incluidos costos de detección reducidos y una aplicabilidad de campo mejorada. Cuando se combina con un analizador de ADN portátil, el biosensor proporciona resultados-fáciles de usar (+/−), lo que lo hace ideal para-implementación in situ. Más allá de BFB
detección, OAR-MNA se ha aplicado con éxito a la detección del virus del mosaico moteado verde del pepino (CGMMV), un patógeno de cuarentena de ARN que causa graves pérdidas en la producción de cultivos de cucurbitáceas. Al permitir un diagnóstico temprano y preciso en el sitio-, el biosensor OAR-MNA representa un avance en la tecnología de detección de patógenos vegetales y ofrece una herramienta prometedora para salvaguardar la producción agrícola mundial.
